問題一:
在過氧化物標記的雙夾心elisa實驗中得到的背景值較高,原因是什么?LowCross-Buffer?能起到什么作用嗎?
答復:了解二抗能否與其他哺乳動物的抗體結合是非常重要的。除非是高度純化的抗體,抗兔lgG的二抗也能夠與鼠lgG,山羊lgG結合,原因是哺乳動物抗體的高度同源性,不經過純化(預吸附)的二抗可以與其他抗體進行高親和性的交叉反應,這種情況下,LowCross-Buffer起不到作用,二抗必須不能與捕獲抗體結合,例如,Biotrend可以提供各類避免此類交叉反應的預吸附抗體。
問題二:
我需要對LowCross-Buffer?進行稀釋嗎?
答復:是即用型的。樣品或檢測抗體直接用此稀釋,僅僅在競爭性實驗或一些免疫組化實驗中,可以用水或一些生理緩沖液對其進行稀釋。在這種情況下,實驗者要通過測試找到合適的比例。
問題三:
LowCross-Buffer?會對酶標檢測的顯色反應產生影響嗎?
答復:LowCross-Buffer?不會使堿性磷酸酶或過氧化物酶活性減弱。
有的用戶把酶標檢測抗體在LowCross-Buffer?孵育后會檢測到酶活性的增強。
問題四:
LowCross Buffer?能用在熒光物質結合物中嗎?比如在蛋白芯片實驗中。
答復:是的,可以用在蛋白芯片中。對于青染料(如Cy5, Cy3,),有的實驗中可觀察到熒光量的增強。
問題五:
可以用于抗體或多克隆抗體嗎
答復:可以,不過在使用多抗時,要注意到多抗中含有親和力不同的多種抗體,LowCross-Buffer?僅允許高親和性的抗體結合而消除低親和性的結合。使用LowCross-Buffer?時可適當增加多抗的濃度,因為抗體濃度的增加也是高親和性抗體濃度的增加,同時LowCross-Buffer?抑制低親和性結合。但是不是要加大抗體的濃度還要取決于抗體的純度。
問題六:
LowCross-Buffer?可以反復凍融嗎?
答復:反復凍融幾次不會有影響,但是在使用前要充分混勻。
問題七:
為什么LowCross-Buffer?能減少交叉反應?
答復:我們所說的基質效應一般是一些基質成分(如人血清標本中的血清蛋白)的與分析物或抗體的低親和性結合。分析物會被標本中的蛋白或其他成分掩蔽掉而不能與抗體結合,抗體也可以被基質掩蔽。LowCross-Buffer?可以減少基質對抗體的掩蔽。
問題八:
LowCross-Buffer?可以用在哪些方面?
答復:LowCross-Buffer?是一種新的用于免疫實驗(如ELISA、WB、蛋白芯片和免疫-PCR)的樣本緩沖液,有助于減少干擾作用,如非特異性結合,交叉反應和基質效應,抗原抗體的高親和結合不會被減弱。
問題九
LowCross-Buffer?能替代表面封閉液嗎?
答復:不行,LowCross-Buffer?不是表面封閉液,你可以用它稀釋樣本和抗體,我們推薦使用CANDOR的封閉液,能起到很好的封閉作用。